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经常听到有实验员说,这个细胞真是太难搞了！确实,对于很多科研工作者来说,细胞是最重要又非常宝贵的东西,承载着实验能否顺利进行下去及一些重要实验数据的希望,但是在冻存复苏的过程中,经常会因为一些小细节导致大问题,下面也总结了四个小细节：
第一, 严格控制好细胞的生长密度.
细胞的密度,就像我们住房环境一样,大小会我们生活的质量.但是他们又跟我们人类不一样,因为细胞的密度可以影响到他们能否生存下去,他们是一群不能挤又不能孤独的娇贵宝宝.细胞密度过高,会让他们没有足够的生存空间；细胞密度过低,会让他们无法互相连接健康的生长.所以,建议大家在细胞接种前,一定要调整好适合细胞生长的浓度,从而提高细胞的存活率.
第二, 严格控制温度.
慢冻速融是细胞冻存复苏的核心关键词之一.常规的冻存操作中,常见的是-4℃→－２０℃至－４０℃→－８０℃→液氮,一定要避免温度原因导致细胞的灭亡.除非使用了成分经过优化,经过严格测试的冻存液,才能免去程序降温这个繁琐的步骤.保存的时候也要保证整个细胞都是处于液氮的液面下方,避免温度对细胞存存活的影响.
第三, 严格控制无菌环境.
天生娇贵的细胞宝宝,如果需要折腾它,一定要在无菌超净的环境下才行.超净工作台,所有的仪器用品一定要提前灭菌,培养箱等也要定期的用酒精擦干.微生物对细胞的影响经常是最开始的时候没发现,等发现的时候已经结束了,所以一定要小心.
第四, 配制细胞冻存液.
除了操作中的一些小细节,还有一个重点就是配制细胞冻存液.常见的冻存液配制要遵循培养基＋血清＋ＤＭＳＯ的成分要求.这里面的血清尤其重要,一定要选择适宜的血清,如果血清不合适,细胞就会生长的特别慢,甚至死亡.配制时也要根据细胞的实际判断成分配比,且建议使用程控仪,注意配制温度,否则就又会影响细胞的存活效果.
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