实验操作中，IHC之石蜡包埋操作注意点及要点
发布时间:2018/10/22 17:09:11 阅读次数：1597

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤：即固定,脱水,透明,浸蜡和包埋,下面我们分步来介绍.

1 固定：取新鲜组织浸泡在4%多聚甲醛或10%福尔马林溶液中固定24-48h.固定完后用自来水冲洗五次,各30min.

以下几点建议请注意：

① 组织离体后应在30min之内固定.

② 固定液容积应为组织的5~10倍,固定时间应依据组织大小而定,固定时间过长,修复后抗原暴露不完全；时间过短则会固定不充分.

③ 脱水机内固定液一定要及时更换.

④ 固定过后应该水洗,否则容易造成脱片和染色不新鲜,同时也不利于蜡块内抗原基因的保存.

2 脱水：组织经过50% 70% 85% 95%的梯度酒精各30min,无水乙醇两次,每次30min完成脱水.

以下几点建议请注意：

① 没经充分固定的组织不得进去脱水.固定脱水温度注意不得超过37℃.

② 用于脱水的试剂容积应为组织总体积的5~10倍以上.

③ 由低向高浓度酒精脱水,级差越小越好,

④ 量大或条件允许,可将大小组织分开脱水,较大组织块脱水时间比较小者.

⑤ 组织置于无水乙醇内的时间不宜过长,以免硬化.

3 透明：分别经过无水乙醇：二甲苯二甲苯（Ⅰ）（根据组织透明度,可减少或增加第二遍二甲苯透明的时间）二甲苯（Ⅱ）各30min.

以下几点建议请注意：

① 二甲苯的容积应为组织总体积的5-10倍以上.

② 透明度时间适宜,依不同种类组织及其大小而异（子宫肌瘤食管等坚硬组织延长；肝脏,小组织缩短）组织呈现棕黄或暗红色透明即可.

③ 二甲苯应及时过滤更换.

4 浸蜡：蜡Ⅰ,蜡Ⅱ各30分钟.

注意点：石蜡温度控制在58-62℃,高于熔点2℃为佳.

5 包埋：将金属托放入熔化的石蜡,再放入组织,冷固待石蜡凝固.

以下几点建议请注意：

① 防止各种异物组织包入蜡块内.

② 包埋应先放石蜡后放组织,速度尽可能快,以免凝固.

③ 包埋用熔蜡应纯净,熔点与浸蜡的相近.

④ 包埋时不得使用明火,以防点燃,镊子不可温度过高,以免烫伤组织.

⑤ 包一个换一把镊子,防止污染.

⑥ 囊壁管腔竖直包埋,所需切面向下包埋；扭曲组织正后包埋；多个小组织可以包在一个面.

IHC（Immunohistochemistry, 免疫组织化学）是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测的技术.IHC实验中保护组织的两种主要方法是对组织进行石蜡包埋和冰冻,其中石蜡包埋是制作组织标本最常用最基本的方法.

石蜡包埋对于组织形态保存完好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察；还能长期存档,供回顾性研究.实验组织保护的质量是保证病理报告准确性的重要环节.